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| 目的：建立以pyrG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的蛋白质表达系统，方法：以PCR扩增获得的黑曲霉菌pryG基因的部分序列片段的为探针作两次噬菌斑原位杂交，从黑曲霉菌ACC 12049基因文库中克隆获得长度为9．8kb的DNA片段，将其中含pyrG基因的2．3kb片段亚克隆至表达性载体PIGF中，获得重组质粒，对克隆基因进行了全基因测定和分析，以黑曲霉菌ATCC 12049的pryG缺陷株M54为受体菌，用聚乙二醇／氯化钙方法作基因转化实验，将重组质粒导入该受体菌并在其中表达。结果：从黑曲霉菌ATCC 12049基因文库中克隆获得了pryG基因，构建了含该基因的重组表达性载体pYG 1.2 ,序列分析表明该基因与黑曲霉菌L112的pryG基因编码序列的同源性为93．9％，两者经推导的氨基酸的同源性为98．9％，重组质粒pYG1．2可使黑曲霉菌ATCC 12049的pryG缺陷株M54发生基因转化，成为Pry^ ，结论：在克隆了pryG基因的基础上成功构建了以pryG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质质粒。 |
| 关键词: 重组质粒 构建 黑曲霉菌 |
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| 通信作者: |
| 修订日期：2000-12-11 |
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| 基金项目:铁道部科技基金B00(40) |
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| Construction of Recombinant Expression Plasmid for Aspergillus niger |
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| Abstract: |
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| Key words: recombinant plasmid construction Aspergillus niger |
