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刘树业,俞新大,宋春娟,张健东,石欣荣,张琚.大鼠肝脏F蛋白基因的克隆和表达[J].同济大学学报（医学版）,2007,(1):10-14. [点击复制]
- .Gene cloning and expression of rat liver-specific F protein[J].Journal of Tongji University(Medical Science),2007,(1):10-14. [点击复制]
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| 摘要: |
| 目的获得大鼠肝脏F蛋白基因克隆(F-protein’s cDNA);利用原核(大肠杆菌)表达系统表达大鼠肝脏F蛋白。方法提取大鼠肝脏总RNA,对其进行反转录和PCR(RT-PCR)扩增出目的基因(F-protein’s cDNA),然后将其与pUCm-T载体进行连接获得克隆质粒pUCm-T-F并转化到大肠杆菌DH5α中;将测序结果正确的克隆片断重新与表达载体pET-15b连接,获得F抗原表达质粒pET15b-F并将其转化到表达菌株BL21(DE3)pLysS中,用1mmol/L IPTG诱导其表达。结果RT-PCR扩增出的目的基因(F-protein’s cDNA),经测序证明与Gene-bank上提供的F蛋白cDNA序列完全一致;表达后的全菌蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白分子量大小约为43 kD,与预期值相符,表达量可达全菌总蛋白量的40%。结论表达的目的蛋白经His-tag柱进行亲和层析纯化,SDS-PAGE检测得到了不含其他杂蛋白的单一F蛋白条带,与豚鼠抗人F蛋白抗血清反应成阳性,说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白有免疫活性。 |
| 关键词: 肝脏,F抗原,大肠杆菌,基因克隆,蛋白表达,大鼠 |
| DOI： |
| 通信作者: |
| 修订日期：2006-06-29 |
| 录用日期： |
| 基金项目:天津市科委重点科研基金资助项目(023802911) |
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| Gene cloning and expression of rat liver-specific F protein |
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| Abstract: |
| Objective To obtain the clone of rat liver-specific F protein,and to express F protein by prokaryotic expression system.Methods Rat liver total RNA was isolated and first-strand cDNA was reversely transcribed by using the PCR reverse primer.Then the cDNA |
| Key words: liver,F-protein,E.coli,gene-cloning,protein-expression,rat, |
